FOXP3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422896-ACT

マウスFoxp3は、フォークヘッド／ウィングドヘリックス型転写因子であるFOXP3をコードしており、制御性T細胞（Treg）の系譜を規定するマスター制御因子として、また免疫寛容の中枢的なコントローラーとして機能する。FOXP3は、T細胞受容体（TCR）シグナル伝達の閾値調節、IL-2経路の抑制、ならびにクロマチン依存的なサイトカイン遺伝子ネットワークの制御を担う転写プログラムを統合し、末梢免疫の恒常性を形成する。FOXP3の破綻または発現の失調は、Tregの分化と抑制機能を損ない、この経路が炎症性・自己免疫様表現型や、免疫介在性疾患モデルにおける応答の変化と関連することが示されている。さらにFOXP3活性は、免疫細胞の可塑性、組織炎症、腫瘍‐免疫相互作用の文脈でも研究されており、Tregプログラムが局所の免疫環境に影響を与える。

FOXP3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Foxp3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXP3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Foxp3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFoxp3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFoxp3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFoxp3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。