FMO3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406605

Panoramica

FMO3 codifica la monoossigenasi 3 contenente flavina (flavin-containing monooxygenase 3), una monoossigenasi microsomiale NADPH-dipendente altamente attiva nel fegato umano che catalizza la N-ossigenazione e la S-ossigenazione di diversi xenobiotici e ammine endogene. Convertendo la trimetilammina (TMA) in N-ossido di trimetilammina (TMAO), FMO3 collega il metabolismo dei nutrienti della dieta alla biochimica redox epatica e ai profili sistemici dei metaboliti. L’attività di FMO3 contribuisce alla capacità di detossificazione e influenza la segnalazione mediata dai metaboliti attraverso interazioni con reti più ampie di biotrasformazione di fase I/fase II. Alterazioni genetiche o funzionali di FMO3 sono associate a una modificata ossidazione delle ammine, inclusa la trimetilaminuria, e sono spesso studiate nel contesto della variabilità interindividuale nel metabolismo dei farmaci e della modulazione di tratti metabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FMO3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FMO3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FMO3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FMO3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FMO3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FMO3 per lo studio della segnalazione di FMO3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FMO3 critici per la funzione di FMO3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FMO3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FMO3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FMO3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FMO3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FMO3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FMO3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FMO3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FMO3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.