Flt-1/VEGFR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400330-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Flt-1/VEGFR1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Flt-1/VEGFR1 Double Nickase Plasmid (h) e il Flt-1/VEGFR1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FLT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Flt-1/VEGFR1 Antibody (D-2): sc-271789
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Flt-1/VEGFR1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400330-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Flt-1/VEGFR1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400330-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLT1 codifica Flt-1/VEGFR1, un recettore tirosin-chinasico ad alta affinità per VEGF-A, VEGF-B e il fattore di crescita placentare (PlGF), che modula la segnalazione endoteliale e l’omeostasi vascolare. In seguito al legame con il ligando, VEGFR1 partecipa alla segnalazione della via del VEGF con effetti a valle sulle cascate MAPK/ERK, PI3K/AKT, PLCγ e della famiglia SRC, influenzando migrazione, sopravvivenza e permeabilità endoteliale. Lo splicing alternativo genera VEGFR1 solubile (sFlt-1), un recettore “esca” che sequestra i ligandi VEGF e regola il bilanciamento angiogenico. Un’attività deregolata di FLT1/VEGFR1 è implicata nell’angiogenesi aberrante e nel rimodellamento vascolare osservati nella biologia dei tumori, nelle patologie retiniche neovascolari, nelle condizioni legate all’ischemia e nei microambienti infiammatori.
Flt-1/VEGFR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.