FGF-19 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401725-ACT

FGF19 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti endocrino FGF-19, un regolatore chiave dell’omeostasi degli acidi biliari, della gestione dei lipidi e del metabolismo del glucosio. In sinergia con FGFR4 e con il co-recettore β-Klotho, la segnalazione di FGF-19 attiva MAPK/ERK e i relativi programmi trascrizionali a valle che coordinano i flussi metabolici epatici e l’inibizione a feedback della sintesi degli acidi biliari. Dal punto di vista fisiologico, questo asse collega il sensing intestinale dei nutrienti alla funzione epatica e contribuisce al controllo del bilancio energetico e dei segnali che regolano la proliferazione cellulare. Una segnalazione FGF19–FGFR4 deregolata è stata implicata nella biologia delle malattie metaboliche e nell’attivazione di vie oncogeniche in molteplici contesti tissutali, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per l’interrogazione delle vie di segnalazione.

FGF-19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FGF19 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FGF-19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FGF19 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FGF19, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FGF-19. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FGF19 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FGF-19 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FGF-19 nelle cellule tumorali con espressione di FGF19 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.