FGF-18 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402175-ACT

FGF18 codifica il fibroblast growth factor 18 (FGF-18), un mitogeno secreto che segnala principalmente attraverso i recettori tirosin-chinasici della famiglia FGFR per regolare la proliferazione cellulare, la sopravvivenza e la specificazione di linea. Nei tessuti umani, FGF-18 contribuisce a programmi di sviluppo e di omeostasi, tra cui condrogenesi e osteogenesi, attivando le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT e modulando il rimodellamento della matrice extracellulare. Le alterazioni della dinamica di segnalazione FGF/FGFR sono spesso studiate in contesti di controllo anomalo della crescita, rimodellamento tissutale e crosstalk del microambiente associato ai tumori. In quanto nodo di via con effetti ampi sulla differenziazione e sulla segnalazione mitogena, FGF18 viene comunemente analizzato in modelli di biologia scheletrica, segnalazione stromale e programmi trascrizionali dipendenti dai fattori di crescita.

FGF-18 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FGF18 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FGF-18 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FGF18 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FGF18, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FGF-18. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FGF18 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FGF-18 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FGF-18 nelle cellule tumorali con espressione di FGF18 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.