ferritin heavy chain Plasmide Double Nickase (h): sc-418152-NIC

FTH1 codifica la catena pesante della ferritina umana, una subunità con attività ferroxidasica che converte Fe²⁺ in Fe³⁺, favorendo una sequestrazione sicura del ferro all’interno dei gusci di ferritina e mantenendo l’omeostasi del ferro intracellulare. Tamponando il ferro labile e limitando la chimica di Fenton, FTH1 influenza le risposte allo stress ossidativo, la funzione mitocondriale e programmi di morte cellulare dipendenti dal ferro, come la ferroptosi. L’espressione di FTH1 è regolata dal sistema elemento responsivo al ferro/proteina regolatrice del ferro (IRE/IRP) e si interseca con il turnover autofagico della ferritina (ferritinofagia) mediato da NCOA4, per controllare la mobilizzazione del ferro. Una biologia della ferritina disregolata e livelli alterati di FTH1 sono spesso collegati a infiammazione, neurodegenerazione, condizioni associate all’anemia e rimodellamento metabolico correlato ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulla gestione del ferro.

ferritin heavy chain Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FTH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FTH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FTH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FTH1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.