FDX1L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426948

Panoramica

Fdx1l codifica la ferredossina 1-like (FDX1L), una proteina mitocondriale della famiglia delle ferredossine implicata in reazioni di trasferimento di elettroni che sostengono l’equilibrio redox mitocondriale e il metabolismo ossidativo. Trasferendo elettroni agli enzimi mitocondriali, FDX1L è in grado di influenzare vie legate al mantenimento dei cluster ferro–zolfo, a reazioni steroidogeniche o associate all’eme e, più in generale, all’omeostasi mitocondriale. La perturbazione dei processi mitocondriali dipendenti dalle ferredossine può modificare la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, la flessibilità metabolica e le risposte allo stress, rendendo Fdx1l rilevante per studi sulla disfunzione mitocondriale. Nei modelli murini, Fdx1l rappresenta un nodo sperimentale gestibile per indagare come il trasferimento di elettroni nel mitocondrio si interfacci con il metabolismo cellulare e con fenotipi rilevanti per la malattia guidati da un’attività mitocondriale compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FDX1L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fdx1l in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fdx1l insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fdx1l a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FDX1L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fdx1l per lo studio della segnalazione di FDX1L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fdx1l critici per la funzione di FDX1L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fdx1l per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FDX1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FDX1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fdx1l. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FDX1L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FDX1L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fdx1l per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fdx1l definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.