Factor XIII B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403574-ACT

F13B codifica la subunità B del fattore XIII della coagulazione, un componente del complesso di transglutaminasi plasmatica che circola come eterotetramero A2B2 e stabilizza la subunità catalitica A nel circolo sanguigno. In seguito all’attivazione da parte della trombina e al legame del calcio, il fattore XIIIa reticola la fibrina e altre proteine della matrice, rafforzando l’architettura del coagulo e aumentandone la resistenza alla fibrinolisi. Attraverso queste reazioni di stabilizzazione della matrice extracellulare, la subunità B del fattore XIII contribuisce all’emostasi e ai processi di rimodellamento associati alla riparazione delle ferite. Alterazioni dell’equilibrio tra le subunità di FXIII e una ridotta attività di FXIII sono associate a fenotipi emorragici e a un’anomala stabilità del coagulo, rendendo F13B un bersaglio rilevante per studi meccanicistici nella biologia della coagulazione.

Factor XIII B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di F13B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Factor XIII B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus F13B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione F13B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Factor XIII B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus F13B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Factor XIII B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Factor XIII B nelle cellule tumorali con espressione di F13B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.