Factor VII Plasmide Double Nickase (h): sc-402582-NIC

Il gene umano **F7** codifica il fattore VII della coagulazione, uno zimogeno serin-proteasico dipendente dalla vitamina K, prodotto principalmente dagli epatociti e secreto nel plasma. In seguito a una lesione vascolare, il fattore VII si lega al fattore tissutale (F3) e viene convertito in fattore VIIa, formando il complesso della tenasi estrinseca che avvia la cascata della coagulazione tramite l’attivazione del fattore X e del fattore IX, con conseguente generazione di trombina e formazione di fibrina. Questo asse fattore tissutale–fattore VIIa interseca anche la segnalazione cellulare attraverso i recettori attivati da proteasi (PAR), collegando la proteolisi emostatica a vie della biologia infiammatoria e vascolare. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di F7 sono associate a diatesi emorragiche e sono studiate anche nel contesto del rischio trombotico e dell’interazione tra coagulazione e infiammazione.

Factor VII Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus F7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di F7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di F7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con F7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.