EYA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-406221-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EYA3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EYA3 Double Nickase Plasmid (h) e il EYA3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EYA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EYA3 Antibody (G-9): sc-515626
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EYA3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406221-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EYA3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406221-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EYA3 (eyes absent homolog 3) codifica un coattivatore trascrizionale e una fosfatasi della famiglia delle alodeidrogenasi degli acidi (haloacid dehalogenase) che integra la segnalazione con i programmi di espressione genica durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. EYA3 partecipa a reti che controllano le decisioni di destino cellulare, la migrazione e le risposte al danno del DNA, in parte attraverso interazioni con i fattori di trascrizione della famiglia SIX e la modulazione della segnalazione dipendente dalla fosforilazione. La sua attività di fosfatasi tirosinica è stata collegata alla regolazione della dinamica del citoscheletro e di vie adattative allo stress che influenzano proliferazione e sopravvivenza. Un’espressione o un’attività alterata di EYA3 è stata associata a fenotipi oncogenici e a processi vascolari e immuno-correlati deregolati, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici nella biologia delle malattie.
EYA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EYA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EYA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EYA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EYA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.