EY-cadherin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401988-ACT

CDH18 codifica la EY-caderina, una molecola di adesione cellula–cellula calcio-dipendente appartenente alla superfamiglia delle caderine, che sostiene l’architettura dei tessuti promuovendo la formazione delle giunzioni aderenti e un coordinato smistamento/ordinamento delle cellule. Attraverso il collegamento alle catenine e al citoscheletro di actina, la EY-caderina può influenzare l’inibizione da contatto, programmi di coesione di tipo epiteliale e reti di segnalazione che intersecano la dinamica della β-catenina e di altri regolatori giunzionali. Un’espressione alterata o un’adesione mediata da caderine deregolata è associata a cambiamenti nella migrazione cellulare, nello stato di differenziamento e nel comportamento invasivo osservati in molteplici contesti patologici. Di conseguenza, CDH18 è spesso studiato in modelli che esaminano la segnalazione dipendente dall’adesione, la morfogenesi e le transizioni dell’identità cellulare.

EY-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH18 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EY-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH18 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH18, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EY-cadherin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH18 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EY-cadherin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EY-cadherin nelle cellule tumorali con espressione di CDH18 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.