Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
EWS Plasmide Double Nickase (h): sc-401036-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EWS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EWS Double Nickase Plasmid (h) e il EWS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EWSR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EWS Antibody (G-5): sc-28327
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EWS Plasmide Double Nickase (h) | sc-401036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EWS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EWSR1 codifica la proteina legante l’RNA EWS, un regolatore multifunzionale della trascrizione e del processamento dell’RNA che collega lo splicing cotrascrizionale con il trasporto e la stabilità dell’RNA. EWS partecipa al controllo trascrizionale associato alla cromatina ed è collegata alle risposte al danno del DNA e all’integrità del genoma attraverso interazioni con l’RNA polimerasi II e con complessi di processamento dell’RNA. La disregolazione di EWSR1, incluse le riarrangiamenti cromosomici che generano proteine di fusione oncogeniche, è una caratteristica molecolare distintiva di diversi sarcomi e di altre neoplasie. Un’alterazione della funzione di EWS può perturbare i programmi di espressione genica, il metabolismo dell’RNA e le reti di segnalazione che controllano proliferazione e differenziamento, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici.
EWS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EWSR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EWSR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EWSR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EWSR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.