Estrogen Receptor alpha Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400011-ACT

ESR1 codifica il recettore degli estrogeni alfa (ERα), un recettore nucleare attivato dal legando che si lega agli elementi di risposta agli estrogeni e coordina programmi trascrizionali che regolano la proliferazione cellulare, la differenziazione e l’omeostasi metabolica. ERα si integra con coregolatori e interagisce tramite crosstalk con le vie PI3K/AKT, MAPK/ERK e con la segnalazione dei fattori di crescita per modulare l’accessibilità della cromatina e la dinamica dell’espressione genica. Nei tessuti umani, l’attività di ESR1 è centrale per la fisiologia ormono-responsiva ed è spesso coinvolta in disfunzioni oncogene e correlate al sistema endocrino attraverso alterazioni dell’espressione, mutazioni o rimodellamento delle vie di segnalazione. Queste caratteristiche rendono ESR1 un nodo chiave per lo studio della segnalazione degli ormoni steroidei, del controllo trascrizionale e dei meccanismi di feedback delle vie di segnalazione in modelli cellulari pertinenti.

Estrogen Receptor alpha Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ESR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Estrogen Receptor alpha Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ESR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ESR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Estrogen Receptor alpha. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ESR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Estrogen Receptor alpha nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Estrogen Receptor alpha nelle cellule tumorali con espressione di ESR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.