ERAP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403804-NIC

L’aminopeptidasi 1 del reticolo endoplasmatico (ERAP1) è un’aminopeptidasi M1 zincodipendente che rifinisce i precursori dei peptidi antigenici fino a lunghezze ottimali per il caricamento sulle molecole MHC di classe I, modellando l’immunopeptidoma cellulare e influenzando il riconoscimento da parte delle cellule T CD8+. Agisce all’interfaccia tra la maturazione delle proteine nel RE e la presentazione dell’antigene, a valle della degradazione proteasomica e del trasporto peptidico mediato da TAP, come parte della via MHC I. Variazioni nell’attività di ERAP1 possono modificare la selezione del repertorio peptidico e le soglie di segnalazione immunitaria, collegandola alla suscettibilità immunogenetica in diversi contesti infiammatori e autoimmuni, in particolare in combinazione con specifici alleli HLA di classe I. ERAP1 è inoltre studiata per possibili ruoli in processi adiacenti allo stress del RE e nella modulazione dell’immunità innata, in cui il trimming peptidico influisce sulla sorveglianza immunitaria.

ERAP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERAP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERAP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERAP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERAP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.