EMID1 Plasmide Double Nickase (m): sc-431233-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EMID1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EMID1 Double Nickase Plasmid (m) e il EMID1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Emid1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EMID1 Antibody (G-12): sc-390288
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EMID1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431233-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EMID1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431233-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EMID1 (EMI domain containing 1) è una proteina secreta associata alla matrice extracellulare, implicata nell’organizzazione delle matrici pericellulari e nella modulazione delle interazioni cellula–matrice durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale nel topo. Grazie alla sua localizzazione nella MEC e ai moduli previsti di interazione proteina–proteina, EMID1 viene studiata nel contesto della segnalazione dipendente dall’adesione, dell’assemblaggio della membrana basale e della regolazione dei processi morfogenetici che influenzano la migrazione e la differenziazione cellulare. La disregolazione della composizione e del rimodellamento della MEC è una caratteristica comune della fibrosi, di anomalie dello sviluppo e delle modificazioni del microambiente tumorale, rendendo Emid1 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici su fenotipi guidati dalla matrice. I modelli murini di Emid1 possono aiutare a chiarire come i componenti della MEC coordinino output di segnalazione che influenzano l’architettura tissutale e le risposte allo stress.
EMID1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Emid1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Emid1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Emid1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Emid1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.