EKLF/KLF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402366-ACT

KLF1（赤芽球系Krüppel様因子；EKLF）は、赤芽球系前駆細胞における段階特異的な遺伝子発現プログラムを制御することで造血（赤血球生成）を統括する、系譜（リネージ）特異的な転写因子である。CACCC配列に結合し、主要な赤芽球系制御因子と協調して、ヘモグロビンのスイッチング、膜および細胞骨格の成熟、赤芽球の代謝リモデリングを促進し、GATA1/TAL1により駆動される転写ネットワークと統合される。KLF1はまた、共制御因子のリクルートを介してクロマチン状態にも影響し、エンハンサー活性や赤芽球分化の軌跡を形作る。KLF1の制御異常や変異は、グロビン発現の変化や貧血に関連する形質など、遺伝性の赤血球表現型と関連しており、赤芽球系の遺伝子制御および血液疾患の機序を研究する上での重要なハブとなっている。

EKLF/KLF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KLF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EKLF/KLF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KLF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKLF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EKLF/KLF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKLF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEKLF/KLF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKLF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEKLF/KLF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。