eIF5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402133-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF5 Double Nickase Plasmid (h) e il eIF5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF5 Antibody (E-10): sc-28309
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402133-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402133-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF5 codifica il fattore eucariotico di inizio della traduzione 5 (eIF5), un regolatore centrale dell’avvio della traduzione che agisce come proteina attivatrice della GTPasi (GAP) per eIF2, favorendo il riconoscimento del codone di inizio e l’assemblaggio produttivo del ribosoma 80S. Modulando l’idrolisi di eIF2–GTP e la fedeltà dello scanning, eIF5 contribuisce a coordinare la sintesi proteica globale con le risposte cellulari allo stress e il controllo della crescita, intersecando vie quali la segnalazione di eIF2 e la risposta integrata allo stress. Un controllo traduzionale alterato che coinvolge eIF5 è stato associato a proliferazione disregolata e a squilibri della proteostasi, rendendo EIF5 un nodo utile per studiare come la dinamica dei fattori di inizio influenzi programmi oncogeni e di adattamento allo stress. Nelle cellule umane, la perturbazione di EIF5 può rivelare dipendenze nella riprogrammazione della traduzione, nell’inizio specifico per mRNA e nella biologia dei granuli da stress.
eIF5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.