eIF4E Plasmide Double Nickase (m): sc-420148-NIC

Il gene murino **Eif4e** codifica eIF4E, la subunità del complesso di inizio della traduzione **eIF4F** che si lega al cappuccio (cap) e riconosce la **7-metilguanosina**, promuovendo il reclutamento del ribosoma sull’mRNA. L’attività di eIF4E integra segnali nutritivi e di fattori di crescita tramite la regolazione **mTORC1–4E-BP** e coopera con la fosforilazione dipendente da **MAPK/MNK** per modulare la traduzione selettiva di trascritti coinvolti in proliferazione, metabolismo e risposte allo stress. Alterazioni dell’abbondanza o della regolazione di eIF4E sono associate a una riprogrammazione della traduzione e a programmi di crescita cellulare deregolati, rendendo **Eif4e** un nodo chiave per lo studio del controllo post-trascrizionale nella biologia dei tumori e nei fenotipi dello sviluppo. Nei modelli murini, la perturbazione di **Eif4e** consente di analizzare in modo meccanicistico la traduzione cap-dipendente, la proteostasi e l’espressione genica accoppiata ai segnali.

eIF4E Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Eif4e nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Eif4e. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Eif4e. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Eif4e interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.