eIF4B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402494-LAC

EIF4B codifica il fattore umano di inizio della traduzione eIF4B, un regolatore della traduzione dell’mRNA cap-dipendente che promuove il reclutamento del complesso di preinizio 43S e potenzia l’attività dell’elicasi dell’RNA nell’asse eIF4F, facilitando lo scanning attraverso 5′ UTR strutturate. Modulando l’efficienza di traduzione, eIF4B integra segnali provenienti da vie di crescita e di stress, incluse PI3K–AKT–mTOR e MAPK, per plasmare l’output del proteoma durante la proliferazione e l’adattamento cellulare. Un’attività deregolata di eIF4B è stata associata a programmi alterati di controllo traduzionale implicati nella segnalazione oncogenica e in fenotipi di sopravvivenza, ed è spesso studiata come nodo di collegamento tra reti di chinasi a monte e la traduzione selettiva di specifici mRNA. Queste caratteristiche rendono EIF4B un bersaglio utile per analizzare la regolazione della traduzione, l’accoppiamento tra segnalazione e traduzione e la proteostasi dipendente dalle vie di segnalazione nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale eIF4B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EIF4B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale eIF4B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EIF4B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di eIF4B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EIF4B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.