eIF4AI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420146

Panoramica

Eif4a1 codifica l’elicasi RNA DEAD-box eIF4AI del topo, un componente fondamentale del macchinario di inizio della traduzione eIF4F che svolge le 5′ UTR strutturate per consentire la scansione del ribosoma e il riconoscimento del codone di inizio. Attraverso il rimodellamento ATP-dipendente della struttura secondaria dell’mRNA, eIF4AI supporta la traduzione cap-dipendente e influenza la proteostasi, l’adattamento allo stress e la progressione del ciclo cellulare. La sua attività si integra con il controllo della sintesi proteica regolato da mTOR e può plasmare programmi di traduzione selettiva che influenzano crescita, metabolismo e differenziamento. Dinamiche alterate dell’inizio della traduzione che coinvolgono le elicasi della famiglia eIF4A sono state collegate a segnali oncogenici, fenotipi del neurosviluppo e disregolazione della risposta allo stress, rendendo Eif4a1 un nodo rilevante per studi meccanicistici del controllo della traduzione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4AI (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif4a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif4a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif4a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF4AI.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif4a1 per lo studio della segnalazione di eIF4AI, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eif4a1 critici per la funzione di eIF4AI
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif4a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF4AI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal eIF4AI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif4a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF4AI Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR eIF4AI (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif4a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif4a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.