eIF2Bα Plasmide Double Nickase (h): sc-404034-NIC

EIF2B1 codifica la subunità eIF2Bα del fattore eucariotico di inizio della traduzione 2B (eIF2B), un eteropentamero che funge da fattore di scambio dei nucleotidi guaninici e rigenera eIF2-GTP per sostenere la sintesi proteica cap-dipendente. eIF2B integra i segnali della risposta integrata allo stress modulando la sensibilità a eIF2α fosforilata, collegando così la disponibilità di nutrienti, la proteostasi e il recupero cellulare dallo stress del RE al controllo della traduzione. Attraverso questo ruolo, EIF2B1 influenza i tassi globali di traduzione, la dinamica dei granuli di stress e i programmi a valle che incidono su crescita e sopravvivenza cellulare. L’alterazione genetica delle subunità di eIF2B, inclusa EIF2B1, è associata a disturbi dello spettro delle leucodistrofie e offre un punto di ingresso meccanicistico per studiare la regolazione traduzionale adattativa allo stress nelle cellule umane.

eIF2Bα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF2B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF2B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF2B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF2B1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.