eIF2A Plasmide Double Nickase (h): sc-413527-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF2A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF2A Double Nickase Plasmid (h) e il eIF2A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF2A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF2A Antibody (3A7A8): sc-517214
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF2A Plasmide Double Nickase (h) | sc-413527-NIC | 20 µg | $410.00 |
EIF2A codifica eIF2A, un fattore non canonico di inizio della traduzione in grado di consegnare il Met-tRNAi iniziatore alla subunità ribosomiale 40S indipendentemente dal complesso ternario eIF2-GTP. L’attività di eIF2A è particolarmente rilevante in condizioni di stress cellulare che attenuano l’inizio canonico, collegando EIF2A alla riprogrammazione della traduzione e al controllo della proteostasi. Attraverso il suo ruolo nella regolazione dell’inizio specifico per mRNA e nella sintesi proteica adattativa allo stress, EIF2A si interseca con la risposta integrata allo stress e con nodi di segnalazione correlati che influenzano la sopravvivenza e l’omeostasi cellulare. Il controllo della traduzione deregolato che coinvolge EIF2A è stato studiato in contesti quali l’adattamento allo stress delle cellule tumorali e lo stress proteotossico associato alla neurodegenerazione, a supporto della sua utilità come bersaglio meccanicistico negli studi di via.
eIF2A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF2A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.