eIF1B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403809-ACT

EIF1B codifica il fattore di inizio della traduzione eucariotica 1B umano (eIF1B), un componente conservato della macchina di inizio della traduzione che favorisce la selezione del codone di inizio e l’assemblaggio efficiente dei complessi di inizio. Influenzando la capacità globale di sintesi proteica, eIF1B si inserisce in programmi cellulari che dipendono da un controllo traslazionale preciso, tra cui la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e l’adattamento ai segnali di nutrienti e fattori di crescita. Un’avvio della traduzione deregolato è una caratteristica ricorrente di stati proliferativi e di adattamento allo stress, rendendo EIF1B rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione dell’espressione genica in contesti associati alla malattia. La perturbazione di EIF1B può quindi essere utilizzata per esplorare come alterazioni della fedeltà di inizio e dell’output traslazionale rimodellino vie a valle e fenotipi.

eIF1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EIF1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

eIF1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EIF1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EIF1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di eIF1B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EIF1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da eIF1B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via eIF1B nelle cellule tumorali con espressione di EIF1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.