EGR1 Plasmide di attivazione CRISPR (r): sc-437290-ACT

EGR1 (early growth response 1) è un fattore di trascrizione “immediate-early” a dita di zinco che, nelle cellule di ratto, collega rapidamente i segnali extracellulari ai programmi di espressione genica. Viene indotto a valle delle vie di segnalazione MAPK/ERK, PKC e calcio-dipendenti e regola processi quali proliferazione, differenziamento, plasticità sinaptica, risposte angiogeniche e adattamento allo stress tramite un controllo trascrizionale specifico del contesto. L’attività di EGR1 si integra con reti associate ad AP-1/NF-κB e può rimodellare la cromatina e gli stati trascrizionali in seguito a stimolazione con fattori di crescita o a lesione. Un’espressione deregolata di EGR1 è stata collegata in letteratura a infiammazione, fibrosi, rimodellamento vascolare e programmi trascrizionali associati ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione genica in risposta agli stimoli.

EGR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (r) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EGR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (r) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione , dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EGR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EGR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EGR1 nelle cellule tumorali con espressione di silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.