EDG-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420644

Panoramica

Lpar1 codifica EDG-2, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) per l’acido lisofosfatidico (LPA) che trasduce segnali lipidici extracellulari in programmi intracellulari che controllano migrazione, proliferazione e sopravvivenza cellulari, nonché il rimodellamento del citoscheletro. EDG-2 coinvolge principalmente le vie Gαi/o, Gαq/11 e Gα12/13 per attivare PI3K–AKT, la segnalazione PLC–Ca2+ e la dinamica dell’actina mediata da RhoA/ROCK, influenzando adesione e contrattilità. Nei tessuti murini, la segnalazione di Lpar1 contribuisce a processi di neurosviluppo, alle risposte vascolari e dei fibroblasti e al traffico delle cellule immunitarie attraverso la regolazione della chemiotassi e della funzione di barriera. Un’attività LPA–EDG-2 disregolata è stata implicata nel rimodellamento infiammatorio e fibrotico e in meccanismi rilevanti per la motilità delle cellule tumorali e il crosstalk con il microambiente, a supporto della sua utilità in modelli di malattia incentrati sulle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lpar1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lpar1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lpar1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EDG-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lpar1 per lo studio della segnalazione di EDG-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lpar1 critici per la funzione di EDG-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lpar1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EDG-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EDG-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lpar1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EDG-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EDG-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lpar1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lpar1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.