EBF4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402438

Panoramica

EBF4 (early B-cell factor 4) è un fattore di trascrizione di tipo elica–ansa–elica della famiglia EBF che si lega al DNA per regolare programmi di espressione genica associati alla specificazione del destino cellulare e alla differenziazione dei tessuti. Coordinando reti trascrizionali che intersecano la regolazione della cromatina e la segnalazione dello sviluppo, EBF4 può influenzare processi legati alla linea cellulare, come l’espressione genica neuronale e quella correlata al sistema immunitario. L’alterata regolazione dei circuiti trascrizionali della famiglia EBF è stata studiata in contesti che includono fenotipi del neurosviluppo e la riprogrammazione trascrizionale associata al cancro, rendendo EBF4 un nodo utile per analizzare la differenziazione deregolata. L’analisi funzionale di EBF4 supporta studi meccanicistici sui bersagli a valle, sull’occupazione di promotori/enhancer e sugli effetti a livello di via su proliferazione e identità cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EBF4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EBF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EBF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EBF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EBF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EBF4 per lo studio della segnalazione di EBF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EBF4 critici per la funzione di EBF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EBF4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EBF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EBF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EBF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EBF4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EBF4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EBF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EBF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.