Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
E4BP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401353
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- E4BP4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico E4BP4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: E4BP4 Antibody (A-9): sc-74415
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
E4BP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401353 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
NFIL3 codifica il fattore di trascrizione bZIP E4BP4, un regolatore dell’espressione genica dipendente dal contesto che integra i segnali circadiani con programmi immunitari e metabolici. E4BP4 influenza la differenziazione e la funzione effettrice nelle diverse linee linfoidi, inclusa la regolazione delle reti di citochine e delle vie di sopravvivenza, e contribuisce al controllo omeostatico della segnalazione infiammatoria. Inoltre, interagisce con circuiti trascrizionali che modellano le risposte cellulari allo stress e la tempistica dello sviluppo, collegando la regolazione ritmica a reti più ampie di controllo genico. Un’attività deregolata di NFIL3/E4BP4 è stata associata, in ambito di ricerca, a patologie immunomediate, fenotipi ematologici e alterazioni dei fenotipi metabolici e circadiani.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NFIL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NFIL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NFIL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina E4BP4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NFIL3 per lo studio della segnalazione di E4BP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni NFIL3 critici per la funzione di E4BP4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NFIL3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal E4BP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal E4BP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NFIL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal E4BP4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR E4BP4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NFIL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NFIL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.