Dynein HC Plasmide Double Nickase (h): sc-400919-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dynein HC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dynein HC Double Nickase Plasmid (h) e il Dynein HC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DYNC1H1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dynein HC Antibody (C-5): sc-514579
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dynein HC Plasmide Double Nickase (h) | sc-400919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dynein HC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DYNC1H1 codifica la catena pesante 1 della dineina citoplasmatica, un motore ATPasico fondamentale che alimenta il trasporto direzionato verso l’estremità meno lungo i microtubuli. La catena pesante della dineina coordina il traffico intracellulare dei carichi, il posizionamento degli organelli, l’assemblaggio del fuso mitotico e il trasporto assonale retrogrado attraverso interazioni con la dynactina e con adattatori di carico, integrandosi con la dinamica dei microtubuli e con le vie di controllo del ciclo cellulare. L’alterazione del trasporto dipendente dalla dineina è stata associata a fenotipi di tipo neuroevolutivo e neuromuscolare, a conferma del ruolo essenziale della proteina nella polarità neuronale e nel movimento vescicolare a lunga distanza. Di conseguenza, DYNC1H1 è ampiamente studiato nell’ambito della regolazione del citoscheletro, dell’omeostasi neuronale e dei meccanismi della logistica intracellulare.
Dynein HC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DYNC1H1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DYNC1H1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DYNC1H1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DYNC1H1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.