DSC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402944-ACT

Il gene umano **DSC1** codifica la desmocollina-1, una proteina di adesione della famiglia delle caderine calcio-dipendenti localizzata nei desmosomi degli epiteli stratificati. DSC1 sostiene giunzioni intercellulari robuste attraverso interazioni tra caderine desmosomiali e l’accoppiamento con plakoglobina, plakofiline e desmoplachina per ancorare i filamenti intermedi, contribuendo così all’integrità della barriera epidermica e alla meccanica dei tessuti. La sua espressione è strettamente legata ai programmi di differenziamento dei cheratinociti e alla morfogenesi epiteliale, e una regolazione alterata di DSC1 viene studiata nel contesto di adesione cellula-cellula compromessa, displasia epiteliale e biologia tumorale. Poiché il rimodellamento dei desmosomi interagisce con la dinamica del citoscheletro e la segnalazione da stress, DSC1 è frequentemente oggetto di studio nei percorsi che governano coesione epiteliale, differenziamento e migrazione.

DSC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DSC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DSC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DSC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DSC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DSC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DSC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DSC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DSC1 nelle cellule tumorali con espressione di DSC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.