DRAK1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411260-ACT

STK17A codifica DRAK1, una chinasi serina/treonina della famiglia delle chinasi associate alla morte (death-associated protein kinase) che modula la segnalazione responsiva allo stress e le decisioni sul destino cellulare. DRAK1 è stata collegata alla regolazione delle vie apoptotiche e di sopravvivenza, con ruoli riportati nel controllo, dipendente dalla fosforilazione, di programmi trascrizionali e della dinamica del citoscheletro. Attraverso la sua attività chinasica, DRAK1 può influenzare processi quali l’integrità mitocondriale, la progressione del ciclo cellulare e le risposte cellulari a stimoli genotossici o infiammatori. Un’espressione alterata di STK17A/DRAK1 è stata osservata in molteplici contesti patologici, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per studiare l’apoptosi e la segnalazione deregolate in modelli cellulari umani.

DRAK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STK17A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DRAK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STK17A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STK17A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DRAK1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STK17A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DRAK1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DRAK1 nelle cellule tumorali con espressione di STK17A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.