Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DR5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401002-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DR5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DR5 Double Nickase Plasmid (h) e il DR5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TNFRSF10B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DR5 Antibody (D-6): sc-166624
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DR5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401002-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DR5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401002-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFRSF10B codifica il recettore di morte 5 (DR5), un membro di superficie cellulare della superfamiglia dei recettori del TNF che trasduce segnali apoptotici quando viene attivato da TRAIL. L’attivazione del recettore promuove l’assemblaggio del DISC con FADD e le caspasi iniziatrici, collegando l’apoptosi estrinseca all’amplificazione mitocondriale e a programmi più ampi di risposta allo stress. La segnalazione di DR5 interagisce con le vie di NF-κB e MAPK, modulando in modo dipendente dal contesto gli esiti infiammatori e di sopravvivenza. Alterazioni dell’espressione di DR5 o dell’accoppiamento delle sue vie di segnalazione sono frequentemente studiate in oncologia e in biologia immunitaria come determinanti della sensibilità all’apoptosi, delle decisioni sul destino cellulare e delle interazioni tra tumore e microambiente.
DR5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNFRSF10B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNFRSF10B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNFRSF10B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNFRSF10B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.