DPYD Plasmide Double Nickase (h): sc-403396-NIC

DPYD codifica la diidropirimidina deidrogenasi, l’enzima limitante nella velocità del catabolismo delle pirimidine che converte uracile e timina in diidrouracile e diidroti mina, collegando il turnover dei nucleotidi al metabolismo cellulare dell’azoto e del carbonio. In quanto importante ossidoriduttasi NADPH-dipendente, l’attività di DPYD influenza l’omeostasi dei pool nucleotidici e può intersecarsi con l’equilibrio redox e con le esigenze bioenergetiche mitocondriali nelle cellule in proliferazione. La variabilità genetica o un’espressione alterata di DPYD è associata a errori congeniti del metabolismo delle pirimidine ed è stata studiata nel contesto delle differenze interindividuali nel metabolismo dei farmaci fluoropirimidinici e nel rischio di tossicità. DPYD rappresenta inoltre un nodo utile per indagare il rimodellamento metabolico, le risposte allo stress dovute a squilibri dei nucleotidi e il crosstalk tra vie che influenzano la sintesi di RNA e DNA.

DPYD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DPYD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DPYD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DPYD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DPYD interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.