Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DNA pol β Plasmide Double Nickase (h): sc-402861-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNA pol β Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNA pol β Double Nickase Plasmid (h) e il DNA pol β Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira POLB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DNA pol β Antibody (D-11): sc-376581
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNA pol β Plasmide Double Nickase (h) | sc-402861-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA pol β Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402861-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POLB codifica la DNA polimerasi beta (DNA pol β), un enzima chiave della via di riparazione per escissione di basi (BER) che colma le lacune di un singolo nucleotide ed elabora gli intermedi 5′-deossiribosio fosfato durante la sintesi di riparazione. Attraverso un’azione coordinata con XRCC1, la DNA ligasi III e le DNA glicosilasi, la DNA pol β contribuisce a mantenere l’integrità del genoma dopo danni ossidativi, alchilazione e perdita spontanea di basi. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di POLB sono state associate a un aumento della mutagenesi e dell’instabilità cromosomica, collegando questa via a meccanismi che contribuiscono alla biologia del cancro e al declino genomico associato all’età. In quanto fattore centrale della BER, la DNA pol β è spesso studiata per il suo impatto sulla segnalazione del danno al DNA, sulle risposte allo stress replicativo e sulla sensibilità cellulare agli agenti genotossici.
DNA pol β Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POLB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POLB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POLB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POLB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.