DGLUCY Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413322-LAC

C14orf159 codifica la proteina umana DGLUCY, un fattore mitocondriale previsto implicato nell’omeostasi metabolica e in processi cellulari legati al controllo del bilancio redox. Sebbene l’annotazione funzionale resti limitata, le evidenze attuali supportano un ruolo nella regolazione di vie mitocondriali, con un potenziale impatto sul metabolismo energetico, sulla gestione delle specie reattive dell’ossigeno e sulle risposte cellulari allo stress. Le varianti dei regolatori del metabolismo mitocondriale vengono spesso studiate in contesti quali la segnalazione proliferativa, la neurobiologia e i fenotipi infiammatori, rendendo DGLUCY un bersaglio utile per studi meccanicistici. L’analisi dell’espressione di DGLUCY e dei readout trascrizionali e metabolici a valle può contribuire a chiarire come questo gene partecipi al rimodellamento delle vie di segnalazione in condizioni fisiologiche e rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale DGLUCY (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di C14orf159 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DGLUCY (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione C14orf159, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DGLUCY. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo C14orf159 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.