Dexras2 Plasmide di attivazione CRISPR (r): sc-437366-ACT

Dexras2 è una piccola GTPasi correlata a Ras, arricchita nel sistema nervoso, che funge da trasduttore di segnale collegando input dipendenti dai recettori e dal calcio alle vie MAPK e dei nucleotidi ciclici a valle. Nei neuroni di ratto, è stata implicata nella modulazione della plasticità sinaptica e della segnalazione circadiana, integrando segnali derivanti dall’attività dei GPCR e dalla segnalazione correlata all’ossido nitrico per plasmare risposte trascrizionali ed elettrofisiologiche. I processi associati a Dexras2 includono la regolazione del ciclo della GTPasi, le interazioni proteina–proteina nei compartimenti sinaptici e programmi di espressione genica dipendenti dall’attività. La disregolazione delle reti di segnalazione della famiglia Ras e delle vie della plasticità neuronale a cui Dexras2 partecipa è rilevante per studi meccanicistici di fenotipi neuropsichiatrici e neurodegenerativi, senza implicare esiti clinici.

Dexras2 Il plasmide di attivazione CRISPR (r) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dexras2 Il plasmide di attivazione CRISPR (r) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione , dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dexras2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dexras2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dexras2 nelle cellule tumorali con espressione di silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.