DDX3X Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401253-ACT

DDX3X codifica una RNA elicasi DEAD-box conservata che rimodella la struttura secondaria dell’RNA e i complessi ribonucleoproteici per coordinare molteplici fasi del metabolismo dell’RNA, tra cui la regolazione trascrizionale, la maturazione del pre‑mRNA, l’esportazione dell’mRNA, l’inizio della traduzione e la dinamica dei granuli da stress. Nelle cellule umane, DDX3X integra segnali che modulano le risposte immunitarie innate e i programmi di stress cellulare, collegando il sensing dell’RNA alle vie associate all’interferone e al controllo della traduzione. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di DDX3X sono state associate a proliferazione deregolata, risposte allo stress aberranti e difetti nel mantenimento del genoma, rendendola rilevante per studi meccanicistici in oncologia e nei disturbi del neurosviluppo. In quanto elicasi dell’RNA multifunzionale, DDX3X è spesso utilizzata come nodo per analizzare la regolazione genica post‑trascrizionale e il crosstalk tra vie di segnalazione.

DDX3X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DDX3X senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DDX3X Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DDX3X nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DDX3X, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DDX3X. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DDX3X nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DDX3X nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DDX3X nelle cellule tumorali con espressione di DDX3X silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.