Dcun1D4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409238

Panoramica

DCUN1D4 codifica Dcun1D4, un membro della famiglia DCN1-like implicato nella regolazione dell’attività delle ubiquitina ligasi E3 cullin-RING attraverso il controllo della neddilazione delle culline. Modulando l’attivazione dei complessi delle culline dipendente da NEDD8, Dcun1D4 può influenzare la proteostasi mediata dall’ubiquitina, la progressione del ciclo cellulare e le vie di segnalazione che dipendono da un turnover tempestivo dei substrati. Un’alterata attività lungo l’asse neddilazione–ubiquitina è ampiamente rilevante per la stabilità del genoma e per i programmi di risposta allo stress, rendendo DCUN1D4 un locus utile per interrogare la specificità di via nei processi dipendenti dalle CRL. La deregolazione della macchina dell’ubiquitina e della neddilazione è osservata in molteplici contesti patologici, a supporto di studi meccanicistici su DCUN1D4 nell’omeostasi cellulare e nelle perturbazioni di via.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dcun1D4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DCUN1D4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DCUN1D4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DCUN1D4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dcun1D4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DCUN1D4 per lo studio della segnalazione di Dcun1D4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DCUN1D4 critici per la funzione di Dcun1D4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DCUN1D4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dcun1D4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dcun1D4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DCUN1D4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dcun1D4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dcun1D4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DCUN1D4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DCUN1D4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.