DC-SIGNR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404217-ACT

Il gene umano **CLEC4M** codifica **DC-SIGNR**, un recettore lectinico di tipo C arricchito nelle cellule endoteliali che riconosce glicani ad alto contenuto di mannosio e glicani fucosilati, mediando un legame ai carboidrati dipendente dal Ca2+. Attraverso funzioni di cattura dei ligandi e di adesione, DC-SIGNR influenza le interazioni cellula–cellula e l’interazione con i patogeni alle interfacce mucosali e vascolari, con effetti a valle sul traffico endocitico e sulla segnalazione dell’immunità innata. L’attività di CLEC4M si interseca con processi di riconoscimento dipendenti dai glicani che modellano la gestione degli antigeni, le risposte infiammatorie e l’ancoraggio dei leucociti. La variabilità genetica e di espressione di CLEC4M è stata studiata in contesti legati alla suscettibilità alle malattie infettive e a fenotipi immuno-correlati, a supporto della sua rilevanza come modulatore delle interazioni ospite–patogeno e ospite–microbo.

DC-SIGNR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLEC4M senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DC-SIGNR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLEC4M nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLEC4M, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DC-SIGNR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLEC4M nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DC-SIGNR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DC-SIGNR nelle cellule tumorali con espressione di CLEC4M silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.