Dab2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400979-NIC

DAB2 (Disabled homolog 2) codifica Dab2, una proteina adattatrice dell’endocitosi che collega l’internalizzazione mediata da clatrina al controllo della segnalazione, legando recettori e fosfoinositidi tramite il suo dominio PTB. Dab2 partecipa al traffico dei recettori e all’attenuazione di vie quali TGF-β, Wnt/β-catenina e MAPK/ERK, contribuendo a regolare polarità cellulare, adesione e programmi di differenziamento. Grazie ai suoi ruoli nel traffico di membrana e nell’integrazione dei segnali, un’espressione o una funzione alterata di DAB2 è associata a una disregolazione dell’omeostasi epiteliale ed è stata studiata nel contesto della progressione oncogenica e di fenotipi legati alla metastasi. Queste caratteristiche rendono DAB2 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul turnover dei recettori, sul crosstalk tra vie di segnalazione e sul controllo del comportamento cellulare guidato dall’endocitosi.

Dab2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DAB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DAB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DAB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DAB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.