D2DR/Dopamine D2 Receptor Plasmide Double Nickase (m): sc-420053-NIC

Drd2 codifica il recettore dopaminergico D2 (D2DR), un GPCR accoppiato a Gi/o che inibisce l’adenilato ciclasi, riduce la segnalazione cAMP/PKA e modula l’attività dei canali ionici, contribuendo a determinare l’eccitabilità neuronale e la trasmissione sinaptica. Il D2DR è altamente espresso nei neuroni spinosi medi dello striato, dove integra il tono dopaminergico con gli input glutamatergici, influenzando i circuiti dei gangli della base, il controllo motorio, la motivazione e l’apprendimento legato alla ricompensa. La segnalazione del recettore coinvolge vie tra cui MAPK/ERK e cascate dipendenti da β-arrestina, collegando la dinamica dei neurotrasmettitori a programmi di espressione genica e alla plasticità. Alterazioni della funzione o dell’espressione di DRD2 sono associate a contesti di ricerca neuropsichiatrica e neurodegenerativa, inclusi studi sulla disregolazione dopaminergica, sulla farmacologia degli antipsicotici e sui meccanismi comportamentali a livello di circuito.

D2DR/Dopamine D2 Receptor Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Drd2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Drd2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Drd2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Drd2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.