cytochrome c1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404958-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cytochrome c1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cytochrome c1 Double Nickase Plasmid (h) e il cytochrome c1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYC1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cytochrome c1 Antibody (A-5): sc-514435
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cytochrome c1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404958-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cytochrome c1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404958-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano CYC1 codifica il citocromo c1, una subunità essenziale del complesso mitocondriale III (complesso citocromo bc1), che trasferisce elettroni dall’ubichinolo al citocromo c all’interno della membrana mitocondriale interna. Questa attività sostiene la fosforilazione ossidativa contribuendo alla traslocazione di protoni, che aiuta a stabilire il gradiente elettrochimico utilizzato per la sintesi di ATP. L’alterazione dei componenti del complesso III può modificare l’equilibrio redox mitocondriale e la produzione di specie reattive dell’ossigeno, collegando la biologia di CYC1 a vie che regolano il metabolismo energetico cellulare e le risposte allo stress. La respirazione mitocondriale deregolata e l’integrità della catena di trasporto degli elettroni sono frequentemente studiate nel contesto del rimodellamento metabolico e della disfunzione mitocondriale associata alla neurodegenerazione.
cytochrome c1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYC1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.