CyPA Plasmide Double Nickase (h): sc-418155-NIC

PPIA codifica la ciclofilina A (CyPA), una peptidil-prolil cis–trans isomerasi ubiquitariamente espressa che accelera il ripiegamento proteico e i cambiamenti conformazionali nel citosol e nel nucleo. CyPA modula la proteostasi e la segnalazione responsiva allo stress, incluse vie associate a chaperoni e la regolazione dell’attività di chinasi e fattori di trascrizione che influenzano apoptosi, infiammazione e progressione del ciclo cellulare. Attraverso interazioni con partner come CD147/BSG e con diverse proteine client, CyPA può plasmare il traffico dei leucociti e le risposte allo stress ossidativo, collegandola a processi cardiovascolari, neuroinfiammatori e associati ai tumori. Un’espressione alterata di PPIA o variazioni dell’attività di CyPA sono state riportate in molteplici contesti patologici, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici su segnalazione, omeostasi proteica e interazioni ospite–patogeno.

CyPA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PPIA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PPIA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PPIA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PPIA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.