CYP7A1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401001-ACT

Il gene umano **CYP7A1** codifica la colesterolo 7α-idrossilasi, un enzima del citocromo P450 arricchito nel fegato che catalizza la prima fase, e quella limitante la velocità, della via classica di sintesi degli acidi biliari a partire dal colesterolo. Controllando la conversione del colesterolo in acidi biliari primari, **CYP7A1** influenza l’omeostasi del colesterolo, la segnalazione enteroepatica e la regolazione a feedback tramite recettori nucleari come **FXR** e i conseguenti programmi genici metabolici. Un’alterata attività di **CYP7A1** è stata collegata a pool di acidi biliari deregolati, a una maggiore suscettibilità all’ipercolesterolemia e a fenotipi metabolici che influenzano l’assorbimento dei lipidi e la gestione epatica dei lipidi. In quanto nodo centrale del metabolismo degli steroli e degli acidi biliari, **CYP7A1** è ampiamente studiato nella biologia degli epatociti, nella regolazione metabolica e nel cross-talk delle vie di segnalazione con infiammazione e risposte agli xenobiotici.

CYP7A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYP7A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP7A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYP7A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYP7A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP7A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYP7A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP7A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP7A1 nelle cellule tumorali con espressione di CYP7A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.