Cyp3a11 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419922-ACT

Il gene murino Cyp3a11 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 che catalizza il metabolismo ossidativo di xenobiotici e substrati endogeni, contribuendo alla clearance epatica e all’omeostasi chimica. L’attività di Cyp3a11 partecipa al metabolismo dei farmaci di fase I e interagisce con vie di segnalazione mediate da recettori nucleari, inclusi PXR e CAR, che coordinano le risposte trascrizionali all’esposizione e allo stato metabolico. Modulando la biotrasformazione di composti e steroidi, Cyp3a11 influenza la variabilità farmacocinetica e la suscettibilità a danno epatotossico in condizioni di stress metabolico o infiammatorio. Un’alterata regolazione di Cyp3a11 è pertanto rilevante per studi sulle interazioni farmaco–farmaco, sulla funzionalità epatica e sui meccanismi gene–ambiente che incidono sui fenotipi tossicologici nei modelli murini.

Cyp3a11 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cyp3a11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cyp3a11 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cyp3a11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp3a11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cyp3a11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cyp3a11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cyp3a11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cyp3a11 nelle cellule tumorali con espressione di Cyp3a11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.