CYP27A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402836-NIC

Il gene umano **CYP27A1** codifica la sterolo 27-idrossilasi, un enzima mitocondriale del citocromo P450 che catalizza l’ossidazione del colesterolo e di intermedi sterolici durante la biosintesi degli acidi biliari. Generando steroli 27-idrossilati, CYP27A1 sostiene il catabolismo mitocondriale degli steroli, contribuisce all’omeostasi lipidica e si integra con le vie epatiche degli acidi biliari, del trasporto del colesterolo e della segnalazione mediata dagli ossisteroli. Un’attività alterata di CYP27A1 modifica la composizione di steroli e acidi biliari ed è stata collegata a errori congeniti del metabolismo degli acidi biliari, come la xantomatosi cerebrotendinea, con effetti a valle sulla deposizione di colesterolo e sulla gestione degli steroli nei tessuti. CYP27A1 è quindi ampiamente studiato nella biologia metabolica, nel funzionamento dei P450 mitocondriali e nella regolazione, mediata dagli ossisteroli, delle reti di recettori nucleari.

CYP27A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP27A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP27A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP27A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP27A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.