CYP1A2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401178-ACT

CYP1A2 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 arricchita a livello epatico, che catalizza il metabolismo ossidativo di numerosi xenobiotici e substrati endogeni, inclusi idrocarburi aromatici e metilxantine. In quanto componente chiave della biotrasformazione di fase I, CYP1A2 opera all’interno della catena di trasferimento degli elettroni del reticolo endoplasmatico e si integra con programmi trascrizionali regolati da AhR che coordinano le risposte di detossificazione. La variabilità interindividuale nell’espressione o nell’attività di CYP1A2 può modificare la capacità metabolica e l’equilibrio dello stress ossidativo, influenzando la suscettibilità alla tossicità indotta da sostanze chimiche e i fenotipi di interazione farmaco–gene nei sistemi sperimentali. La sua regolazione viene comunemente studiata in modelli di differenziazione epatica, di segnalazione infiammatoria e di esposizione ambientale, in cui l’induzione trascrizionale rappresenta un parametro di lettura principale.

CYP1A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYP1A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP1A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYP1A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYP1A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP1A2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYP1A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP1A2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP1A2 nelle cellule tumorali con espressione di CYP1A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.