CYP17A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401918-NIC

CYP17A1 codifica il citocromo P450 17A1, una monoossigenasi microsomiale che catalizza le reazioni di 17α-idrossilasi e 17,20-liasi, centrali nella steroidogenesi. Convertendo pregnenolone e progesterone in intermedi 17-idrossilati e generando successivamente deidroepiandrosterone e androstenedione, CYP17A1 contribuisce a regolare il flusso attraverso le vie biosintetiche dei glucocorticoidi e degli ormoni sessuali. La sua attività si integra con il trasferimento di elettroni dalla P450 ossidoriduttasi nel reticolo endoplasmatico e influenza i circuiti di feedback endocrino che controllano la produzione di ormoni surrenalici e gonadici. Una funzione o un’espressione disregolata di CYP17A1 è implicata in fenotipi di squilibrio degli ormoni steroidei e offre un punto di accesso meccanicistico per studiare la segnalazione legata al metabolismo in modelli di malattie endocrine.

CYP17A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP17A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP17A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP17A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP17A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.