cyclin A Plasmide Double Nickase (h): sc-400119-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cyclin A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cyclin A Double Nickase Plasmid (h) e il cyclin A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CCNA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cyclin A Antibody (BF683): sc-239
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cyclin A Plasmide Double Nickase (h) | sc-400119-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cyclin A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400119-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNA2 codifica la ciclina A, un regolatore centrale della progressione del ciclo cellulare che coordina l’attività delle CDK durante la fase S e la transizione G2/M. I complessi ciclina A–CDK2 e ciclina A–CDK1 modulano l’attivazione delle origini di replicazione del DNA, la duplicazione dei centrosomi e la segnalazione dei checkpoint, per garantire un’accurata duplicazione del genoma e l’ingresso in mitosi. L’espressione di CCNA2 è controllata in modo rigoroso dai programmi trascrizionali dipendenti da E2F e dalla proteolisi mediata dall’ubiquitina tramite APC/C, collegando l’abbondanza della ciclina A alle risposte allo stress replicativo e al danno al DNA. Un’attività deregolata di CCNA2 è frequentemente associata a un’alterazione del controllo della proliferazione e a instabilità genomica, rendendola un bersaglio comune negli studi sui circuiti oncogenici del ciclo cellulare e sulle aberrazioni cromosomiche.
cyclin A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCNA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCNA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCNA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCNA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.