CUL-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400972-NIC

Il gene umano **CUL1** codifica la cullina-1 (CUL-1), un’impalcatura centrale dei complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), che catalizzano l’ubiquitinazione e il turnover proteasomiale di substrati fosforilati. Attraverso un’assemblaggio regolato con SKP1, RBX1 e diversi adattatori F-box, CUL-1 controlla le transizioni del ciclo cellulare, il licensing della replicazione del DNA e la trasduzione del segnale, indirizzando la degradazione di regolatori chiave quali cicline, inibitori delle CDK e fattori di trascrizione specifici di via. L’attività di CUL-1 è modulata dalle dinamiche di neddilazione/deneddilazione e collega la proteostasi dipendente dall’ubiquitina al controllo dei checkpoint e alle risposte allo stress. La deregolazione del turnover dei substrati mediato da SCF–CUL1 è stata associata, in contesti cellulari rilevanti per la malattia, a segnalazione oncogenica, instabilità genomica e alterazioni della segnalazione infiammatoria o metabolica.

CUL-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CUL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CUL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CUL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CUL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.