Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-432122-ACT

Il gene murino **Nlrp3** codifica la **criopirina** (NALP3/NLRP3), un recettore citosolico di riconoscimento di pattern che nuclea l’inflammasoma NLRP3 in risposta a molteplici segnali di pericolo, come flussi ionici, stress mitocondriale e danno lisosomiale. L’assemblaggio dell’inflammasoma promuove l’attivazione della caspasi-1 dipendente da ASC, portando alla maturazione e al rilascio di IL-1β e IL-18 e all’induzione della morte cellulare piroptotica. La segnalazione di NLRP3 integra il rilevamento immunitario innato con il priming mediato da NF-κB e con le reti citochiniche a valle che modellano l’attivazione mieloide, l’infiammazione tissutale e la difesa dell’ospite. Un’attività di NLRP3 deregolata è ampiamente utilizzata come asse meccanicistico per modellare nei topi fenotipi autoinfiammatori e i contributi dell’infiammazione ai processi patologici metabolici, neuroinfiammatori e cardiovascolari.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Nlrp3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Nlrp3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Nlrp3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cryopyrin/NALP3/NLRP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Nlrp3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cryopyrin/NALP3/NLRP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cryopyrin/NALP3/NLRP3 nelle cellule tumorali con espressione di Nlrp3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.